TTC染色原理的介紹

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TTC染色是TTC和活細胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶反應(yīng),生成紅色的甲月贊，用來表示細胞的活力。配制多為2％,染色要避光，37度條件下，它是評價腦缺血損傷常用的指標(biāo)。

    TTC染色原理

    TTC（2,3,5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感復(fù)合物,1894年首次合成用來檢測種子的生存能力,1958年開始用來染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體,與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色,而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降,不能反應(yīng),故不會產(chǎn)生變化呈蒼白。

    TTC可以被活細胞中的具有還原活性的酶(好像主要是琥珀酸脫氫酶)還原生成粉紅色的還原產(chǎn)物，所以活組織部分呈現(xiàn)粉紅色，而死亡的細胞的還原酶的活力已經(jīng)消失，因此TTC不能被還原，所以死亡的組織呈現(xiàn)白色。

    對于種子或者植物組織來說，染色結(jié)果為活組織被染成不同程度的紅色，死組織或者無生命力的組織不著色。對于缺血梗塞組織，因組織壞死脫氫酶活力喪失呈現(xiàn)蒼白色，而正常組織呈深紅色。TTC常用的染色濃度為2%（w/v），也可根據(jù)組織類型做濃度的適當(dāng)調(diào)整。

    TTC染色步驟

    1、取腦：可麻醉后直接取腦或經(jīng)生理鹽水灌注后取腦。因為腦組織未用多聚甲醛固定，所以較軟，取腦時更應(yīng)仔細，保持大腦的完整性。

    2、－20度冰箱中速凍20分鐘左右，便于切片。

    3、切片：一般切成5－6片，每隔2mm切一片。第一刀在腦前極與視交叉連線中點處；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。如果需計算面積的話，應(yīng)切得均勻或用專門的腦槽。

    4、將切片置于TTC中，常規(guī)濃度為2%，也有用1%或更低濃度的。

    5、用錫箔紙蓋住后，放入37C溫箱15～30min，不時翻動腦片，使均勻接觸到染色液。

    6、染色后效果：為皮層下梗死。

    TTC染液是一種脂溶性光敏感復(fù)合物，用TTC染色即可用來檢測種子的生存能力，也可用來檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。檢測機制在于TTC本身可作為一種氧化還原指示劑，活細胞內(nèi)的脫氫酶（尤其是線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶）可以將TTC還原為紅色甲臢化合物TPF（1,3,5-triphenylformazan）。

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